小鼠抗体可变区基因扩增试剂盒

使用说明书

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

第1版（2016年04月修订）

[产品信息]

本试剂盒可以用于对杂交瘤、小鼠外周血单个核细胞、小鼠脾细胞及小鼠其他组织中抗体可变区基因的扩增。相关标本前期需经过mRNA提取和用oligo dt 为引物反转录成cDNA。本试剂盒通过对扩增体系中的组分进行了优化，即保证了扩增的特异性，又扩大了对所有抗体基因的兼容性。可用于任意杂交瘤中鼠源抗体基因的扩增，小鼠免疫后全部抗体基因的扩增和小鼠抗体文库的构建。

[试剂组分] 

货号	名称	规格
IS088-1	小鼠抗体重链扩增体系	100ul
IS088-2	小鼠抗体轻链扩增体系	100ul
IS088-3	Taq DNA聚合酶预混体系	500ul
IS088-4	阳性对照	5ul

[适用范围]

小鼠抗体可变区基因扩增

[储存及有效期]

-20℃保存，有效期6个月。

[实验操作]

所有试剂融化后瞬时离心并放置于冰上，按下列组分配制反应体系（以10ul为例）

1、扩增抗体重链

名称	体积ul
小鼠抗体重链扩增体系	1
Taq DNA聚合酶预混体系	5
cDNA	a（含2-100ng DNA，约0.2-1ul）
H2O	4-a

备注：如需做阳性对照，将cDNA换成1ul阳性对照 (IS088-4) 即可。

2、扩增抗体轻链

名称	体积ul
小鼠抗体重链扩增体系	1
Taq DNA聚合酶预混体系	5
cDNA	a（含2-100ng DNA，约0.2-1ul）
H2O	4-a

备注：如需做阳性对照，将cDNA换成1ul阳性对照 (IS088-4) 即可。

3、按下列条件扩增

Temp	Time	Cycles
94℃	3min	1
94℃	30s	30
55℃	30s
72℃	45s
72℃	5min	1
4℃	∞	1

4、PCR产物经2％琼脂糖电泳后，取350bp左右的DNA条带为模板进行二次PCR大扩回收，经TA克隆后测序即可获得抗体可变区基因。

[注意事项]

1、试剂避免反复冻融，否则会影响扩增效率；

2、建议采用新鲜标本的cDNA为模板；

3、反应体系的配置在冰上完成。