无血清293细胞培养基
使用说明书
仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
第1版（2016年04月修订）
[关联信息]
无血清293细胞培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞（如293-F，293-T，Expi-293F等）的高密度生长和瞬时转染表达。无血清293细胞培养基含有细胞生长所需的全部营养成份，无需添加任何添加物即可使用。无血清293细胞培养基的基本信息如下表所示：
外观： | 澄清透明红色液体 |
渗透压： | 275±15 mOSM |
pH： | 6.9-7.4 |
无菌检测： | 无菌 |
内毒素： | <5 EU/mL |
[制品内容]
编号 | 名称 | 规格 |
IS91-1 | 无血清293细胞培养基 | 100ml |
IS91-2 | 无血清293细胞培养基 | 2*500ml |
[储存及有效期]
2-8℃避光保存，有效期一年。
[使用方法]
以下步骤仅供参考
（一）细胞驯化
1）直接驯化
大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞，可以直接适应无血清293细胞培养基，只要按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。
2）渐进式驯化
注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化
①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，当细胞密度达到2x106 cells/ml后进行传代，传代细胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL，5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与无血清293细胞培养基的比例为75:25；
②将细胞置于37℃，5% CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；
③当细胞密度3-4天后达到3x106 cells/ml且细胞活率>90%，传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与无血清293细胞培养基的比例为50:50，细胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与无血清293细胞培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养；
④重复步骤③逐步增加无血清293细胞培养基所占的比例（5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与无血清293细胞培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的无血清293细胞培养基；
⑤经过在100%的无血清293细胞培养基中的几次传代培养，传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×106 cells/mL，细胞存活率大于90%，这说明细胞已经完全适应了无血清293细胞培养基。之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.3×106cells/mL，一般传代2-3次后再进行转染实验。
注意: 一般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但一般从第四代开始状态会有改善。
（二）细胞传代
1）取细胞培养样品，人工或仪器测定细胞密度以及活率；
2）计算传代所需的细胞用量，建议起始细胞密度为0.2-0.4×106 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议15-20 mL（100 mL的培养瓶）或50-60 mL（250 mL 的培养瓶）；
3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养，3-4天传代一次。
细胞转染在无血清293细胞培养基中，采用商业化转染试剂（例如ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit）或PEI可以实现对HEK293细胞的高效转染。
[注意事项]
1、取液或者分装需在超净工作台，防止污染物进入；
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作并严格按照实验室安全操作手册进行。
