PEG1450溶液（50%）

使用说明书

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

第1版（2016年04月修订）

[关联信息]

PEG1450溶液（50%，无菌）主要由PEG1450（CAS号25322-68-3）、磷酸盐等组成，其作用原理使能够改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处在双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用下，细胞发生融合。在单克隆抗体制备过程中，PEG1450可作为融合剂，诱导脾细胞和骨髓瘤细胞融合，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞。

[制品内容]

编号	名称	规格
IS097-1	PEG1450溶液（50%，无菌）	10ml
IS097-2	PEG1450溶液（50%，无菌）	10*10ml

[储存及有效期]

4℃保存，有效期6个月。

[使用方法]

单层贴壁细胞

1、将杂交前体细胞以相同数量（5×10⁴/ml）接种，以适当的培养基培养 细胞，待细胞贴壁扩展至汇合成片（80%汇合率）的密度。

2、吸干培养液，加入 PEG1450溶液（50%，无菌），轻轻转动1min使PEG1450溶液覆盖所有细胞。

3、静置1min，加入完全MEM培养液以稀释PEG1450溶液，吸干净稀释的PEG1450溶液，再用5ml MEM培养液洗涤被PEG处理的细胞。

4、吸干净洗液，加入 MEM培养液，37℃，5% CO2培养过夜。

5、24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT选择培养剔除HPRT和TK缺陷细胞。

6、弃上清液，用补加1×HT和1×A的完全培养液重新悬浮细胞。融合后进行异核体分析，杂交前体细胞在4~5天内发生死亡。  

悬浮细胞

1、将两种不同亲体的细胞各1ml（约为1×10⁷）混匀，离心以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1ml，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮。

2、在离心管中加入1ml PEG1450溶液（50%，无菌），置于37℃水浴，加入提前37℃预热的含10%胎牛血清的MEM培养液，使PEG1450稀释并停止作用。

3、离心，弃上清液，加入5ml完全MEM培养液以稀释PEG1450溶液，吸干净稀释的PEG1450溶液。

4、用5ml无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液，重复1次该步骤。加入含有胎牛血清的HAT选择培养基，混匀，将细胞悬液用培养液稀释至5×10⁴/ml，接种于96孔板，37℃ 5% CO2孵育过夜24~48h后选出融合细胞。   

 

[注意事项]

1、应注意无菌操作，避免被微生物污染；  

2、PEG1450溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液；  

3、体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞； 

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作并严格按照实验室安全操作手册进行。