总抗氧化能力检测试剂盒A015-2）

使用说明书

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

第1版（2016年04月修订）

[预期应用] 

本试剂盒利用ABTS法测血清、血浆、组织匀浆，细胞，细胞上清中总抗氧化能力（T-AOC）。

[试剂盒内容]

试剂	数量(96T)	试剂	数量(96T)
Reagent 1	1×20ml	Reagent 4	1×0.2ml
Reagent 2	1×1ml	Reagent 5	1×0.1ml
Reagent 3	1×0.5ml	说明书	1

[需自备的设备及试剂]

405-425nm滤光片的酶标仪

 

[试剂盒的储存及有效期]

1. Reagent 1：缓冲液溶液,  -20^oC可保存6个月。              

2. Reagent 2：ABTS原溶液, -20^oC可保存6个月, 需避光保存。              

3. Reagent 3：H₂O₂溶液， -20^oC避光可保存6个月。             

4. Reagent 4：过氧化物酶溶液，-20^oC避光可保存6个月。            

5. Reagent 5：10mM Trolox溶液, -20^oC可保存6个月, 需避光保存。   

               

[试剂准备]

1. 试剂3溶液配制：将双蒸馏水（DWW）稀释至原来体积的1000倍。

2. ABTS溶液制备：混合试剂1、试剂2和3溶液，比例为76:5:4，按需求量配置ABTS溶液。ABTS溶液应在没有光照的室温下保存，在30分钟内使用。

3. 试剂4溶液制备：用试剂1稀释试剂4至其原始体积的10倍。试剂4溶液应在使用前按所需量配制。

 

[标本处理]

1. 血浆/血浆等液体样本              

预处理：直接检测。注意，制备血浆样品，不推荐使用EDTA作为抗凝剂。         

     

2. 组织样本              

预处理：准确称量样品，按比例加入生理盐水，如1g样品加入9g生理盐水。在冰上匀浆，于4^oC，12000 rpm/min 离心5min ，取上清液用于实验。              

 

3. 细胞              

预处理：收集不少于100万个细胞，加入200μL预冷磷酸盐缓冲液。通过均浆或超声处理破细胞，于4℃、12000 rpm/min离心5min，取上清液用于实验。              

注意：对于组织样本和细胞，需检测总蛋白浓度。建议使用IS003 BCA蛋白定量检测试剂盒测定蛋白质浓度。

 

[操作步骤]

操作表

	空白	标准	样本
双蒸水(μl)	10
Trolox 溶液 (μl)		10
样本 (μl)			10
试剂4溶液 (μl)	20	20	20
ABTS 溶液 (μl)	170	170	170
室温反应6分钟，在414nm波长测量各孔O.D.值。

注：建议用双蒸水将Trolox 溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM，绘制标准曲线。

 

[实验原理]

ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS·+，在抗氧化物存在时，ABTS·+的产生会被抑制，在 405nm或 734nm测定ABTS·+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox是一种V_E的类似物，具有和V_E相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如，Trolox的总抗氧化能力为 1，相同浓度情况下，其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相比的倍数来表示。

 

[下载]

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